Лабораторная диагностика

Для диагностики заболеваний системы крови используется широкий спектр лабораторных исследований. Для большинства патологий достаточно выполнения 3-х исследований:

1.  Одним из эффективнейших «скрининговых» методов диагностики в гематологии является клинический или общий анализ крови (ОАК). Применение высокотехнологичных автоматических гематологических проточных анализаторов, выполняющих исследование более чем 10000 клеток в одном образце, позволяет повысить точность, воспроизводимость и диагностическую значимость данного анализа.

• Общий анализ крови (Complete Blood Count, CBC)
• Лейкоцитарная формула (дифференцированный подсчет лейкоцитов, лейкоцитограмма, Differential White Blood Cell Count)
• СОЭ (Cкорость Оседания Эритроцитов, ESR)
• Ретикулоциты (Reticulocytes)

2.   Цитологическое исследование костномозговых элементов. Костный мозг получают посредством проведения аспирационной биопсии в области грудины или подвздошной кости. Миелограмма позволяет судить о клеточности костного мозга, пролиферативной активности, дифференцировке и лейкоэритробластическом соотношении, а также о морфологии гемопоэтических клеток. Выявленные изменения гемопоэза могут носить опухолевый и функциональный (реактивный) характер. 

3.  Гистологическое исследование костного мозга, полученного при проведении трепанобиопсии , помимо клеточного состава косномозговых лакун, также дает представление о расположении клеток относительно стромы костного мозга и относительно друг друга. Имеется возможность комплексной оценки стромального компонента, например, наличия миелофиброза, состояния жировой ткани.
 

Дополнительные методы исследования.

В целом ряде случаев для подтверждения варианта того или иного заболевания системы крови необходимо проведение дополнительных высокотехнологичных исследований:

1. Иммунофенотипирование клеток крови и костного мозга

Иммунофенотипирование клеток – это определение кластеров дифференцировки (англ. cluster of differentiatio, сокращенно CD) на поверхности клеток крови и, соответственно, принадлежности клеток к той или иной субпопуляции (например, Т-хелперы CD45+,CD3+, CD4+). В настоящее время данное исследование осуществляется на проточных цитофлюориметрах. Так, например, иммунофенотипирование лимфобластов имеет большое значение в диагностике острых лимфолейкозов и позволяет делать заключение о прогнозе и наиболее подходящей схеме лечения. В зависимости от экспрессируемых дифференцировочных маркеров, В-лимфобласты разделяются на ранние про-В-, поздние про-В- и пре-В-лимфобласты. Ранние про-В-клетки экспрессируют CD19, CD34 и цитоплазматический CD22. Поздние про-В-клетки характеризуются присутствием терминальной деоксинуклеотидилтрансферазы, CD10, CD79a и, в ряде случаев, CD20 и поверхностного CD22. Отличительной особенностью пре-В-клеток является присутствие в цитоплазме тяжёлых цепей иммуноглобулинов класса μ. Острые Т-клеточные лимфобластные лейкозы делят на 5 иммунофенотипов: про-Т-, пре-Т-, кортикальные Т-, зрелые αβ или γδ Т-клеточные ОЛЛ. Клетки всех пяти иммунофенотипов экспрессируют цитоплазматический CD3. Про-Т-лимфобласты отличаются присутствием CD7, пре-Т-лимфобласты — CD2 и/или CD5. Кортикальные Т-клетки, в отличие от всех остальных, синтезируют CD1a. Зрелые Т-клеточные ОЛЛ классифицируют в зависимости от того, какой вариант Т-клеточного рецептора они несут на своей мембране

2. Цитогенетические исследования и молекулярно-генетические исследования

Цитогенетическое исследование применяется для оценки количества и структуры хромосом. Например, цитогенетическая диагностика хронического миелоидного лейкоза основана на обнаружении так называемой филадельфийской хромосомы (Ph') – результата перестройки хромосом из 9-й и 22-й пар, то есть транслокации t(9;22). Существуют разные методы цитогенетического анализа – например, широко известен метод флуоресцентной гибридизации in situ (Fluorescent in situ Hybridization, FISH). Высокочувствительный молекулярно-генетический анализ применяется для более точной диагностики многих заболеваний, но и для многих других целей: например, для контроля минимальной остаточной болезни и максимально раннего обнаружения рецидива лейкоза, когда немногочисленные лейкемические клетки еще нельзя обнаружить стандартными методами. Например, основным методом молекулярной диагностики и молекулярного мониторинга хронического миелолейкоза является количественное определение экспрессии химерного онкогена BCR-ABL методом ПЦР в реальном времени. Молекулярный мониторинг BCR-ABL приобрел важнейшее значение с появлением лекарств – ингибиторов тирозинкиназ, первым из которых явился иматиниб, поскольку при этой терапии у пациентов достаточно быстро достигается полный цитогенетический ответ, и дальнейшее отслеживание динамики опухолевого клона цитогенетическими методами становится невозможным.

В связи с многообразными проявлениями заболеваний системы крови для дополнительной диагностики используются и другие методы:

Цитохимическое исследование костного мозга. В настоящее время цитохимические методы диагностики используются для оценки направленности дифференцировки клеток и основана на изучении ферментативной активности (миелопероксидаза, PAS реакция, неспецифические эстеразы, фосфатазы) и содержания различных маркеров (липиды, негемоглобиновое железо) в клетках крови, костного мозга, лимфоузлов.

Выявление, иммунохимическая характеристика и количественная оценка парапротеинов в сыворотке и моче, включая выявление и количественное определение белка Бенс-Джонса в сыворотке.

Количественное определение прогностических показателей в дебюте секреции и в динамике – по назначению клинициста (СРБ, бета 2-микроглобулин);

Оценка вторичных изменений (иммунодефицит и другие вторичные гаммапатии, воспаление, наличие и тип патологической протеинурии), определение активности РФ по результатам скрининга.